Diagnóstico micológico de histoplasmosis en Uruguay, reporte de una serie de casos de la última década

Introducción: La histoplasmosis es una micosis sistémica que afecta a humanos, su agente Histoplasma capsulatum, hongo dimorfo, es ubicuo en la naturaleza. Frecuentemente se presenta como reactivación en personas con infección por VIH/SIDA, con manifestaciones polimórficas y diseminadas. Las lesiones mucocutáneas son una importante llave diagnóstica. Objetivo: Contribuir al conocimiento de esta patología a través del reporte de los diagnósticos de laboratorio de histoplasmosis realizados en Uruguay en los últimos 10 años. Materiales y Métodos: Se realizó un estudio observacional, retrospectivo de las histoplasmosis diagnosticadas en el laboratorio de referencia de Micología de Facultad de Medicina y dos laboratorios clínicos. Se enrolaron los registros clínicos y analíticos asociados. Resultados: Fueron 69 los diagnósticos de histoplasmosis. Más de 80% correspondió a personas con infección por VIH/SIDA. El 62,3% del total presentó lesiones de piel y/o mucosas y en 58% el diagnóstico se realizó mediante el estudio de estas. El 62,3% de los diagnósticos se realizaron mediante la visualización al microscopio óptico de frotis coloreados. Conclusiones: La mayoría de las histoplasmosis se vinculan a la infección por VIH/SIDA. El estudio micológico de las lesiones de piel y/o de mucosas, es accesible, mínimamente invasivo, rápido y presenta una excelente performance diagnóstica.

Background: Histoplasmosis is a systemic mycosis that affects humans, its agent Histoplasma capsulatum, a dimorphic fungus, is ubiquitous in nature. It frequently presents as reactivation in people with HIV/AIDS infection, with polymorphic and disseminated manifestations. Mucocutaneous lesions are characteristic and an important diagnostic key. Aim: To contribute to the knowledge of this pathology through the report of histoplasmosis laboratory diagnosis made in Uruguay in the last 10 years. Methods: We conducted an observational, retrospective study of diagnosed histoplasmosis in the Mycology reference laboratory of the Faculty of Medicine and two clinical laboratories. Associated clinical and analytical records were obtained. Results: There were 69 histoplasmosis diagnoses. More than 80% corresponded to people with HIV/AIDS infection. 62.3% of the total presented skin and/or mucosal lesions and in 58% the diagnosis was made by studying them. 62.3% of the diagnoses were initially made by viewing colored smears under an optical microscope. Conclusions: Most histoplasmosis is linked to HIV/AIDS infection. Exposure to a high fungal load is a constant in cases of immunocompetent individuals. The mycological study of skin and/or mucosal lesions is accessible, minimally invasive, fast and has excellent diagnostic performance.

Método convencional para o diagnóstico de micoses: um estudo comparativo / Conventional method for the diagnosis of mycoses: a comparative study

Introdução: O método clássico para o diagnóstico de micoses é realizado pelo Exame Micológico Direto (EMD) e cultural, que possibilita a visualização de estruturas fúngicas vegetativas e estruturas reprodutivas, respectivamente. Essa combinação é fundamental para reduzir possíveis erros analíticos e aumentar a precisão do diagnóstico. Métodos: Com a finalidade de verificar a frequência do EMD e cultural, e comparar seus parâmetros de sensibilidade e especificidade, realizamos uma análise retrospectiva entre janeiro de 2018 e maio de 2020, de 1603 laudos micológicos oriundos de um laboratório de análises clínicas, localizado em Porto Alegre. Resultados: Após a análise dos laudos observamos que a maioria dos casos apresentaram o EMD negativo com cultura positiva (36,24%). Na sequência, 30,87% dos casos foram de amostras negativas e 25,57% dos laudos foram positivos para ambos os exames. A minoria dos casos (7,29%) apresentou o EMD positivo com cultura negativa. Conclusão: Esta análise revelou que o exame cultural é mais sensível e específico, demonstrando uma maior confiabilidade no diagnóstico. Entretanto, vale ressaltar que a realização dos exames em conjunto, além de reduzir possíveis erros analíticos, proporciona um diagnóstico melhor fundamentado. (AU)

Introduction: The classic method for the diagnosis of mycoses is performed by both direct mycological examination (DME) and culture, which allow the visualization of vegetative and reproductive fungal structures, respectively. This combination is essential to reduce possible analytical errors and increase the accuracy of the diagnosis. Methods: To assess the frequency of DME and culture, and compare their parameters of sensitivity and specificity, we performed a retrospective analysis of 1603 mycological reports produced between January 2018 and May 2020 in a clinical analysis laboratory in Porto Alegre, southern Brazil. Results: After analyzing the reports, we observed that most cases presented a negative DME and a positive culture (36.24%). Subsequently, 30.87% of the cases were negative for both tests, and 25.57% were positive for both tests. The minority of cases (7.29%) presented a positive DME and a negative culture. Conclusion: Our analysis revealed that cultural examination is more sensitive and specific, showing greater reliability in the diagnosis. However, it is noteworthy that performing the tests together, in addition to reducing possible analytical errors, provides a more consistent diagnosis. (AU)

Concordancia entre los métodos del diagnóstico micológico de la paracoccidioidomicosis / Concordance between methods of mycological diagnosis of paracoccidioidomycosis

La paracoccidioidomicosis (PCM) es una enfermedad crónica, sistémica, granulomatosa, endémica en nuestro país, producida por un hongo dimorfo denominado Paracoccidioides brasiliensis. Existen numerosas técnicas para realizar el diagnóstico de esta entidad. Nos planteamos la posibilidad de realizar un estudio para determinar la concordancia que pudiese existir entre las diferentes técnicas que se utilizan para el diagnóstico de la PCM. Se realizó un registro de historias clínicas. Se evaluaron 251 historias clínicas de pacientes con diagnóstico de PCM, de la consulta externa de la Sección de Micología Médica “Dr. Dante Borelli” del IMT-UCV, entre los años 2000 y 2010. Se determinó la concordancia entre los métodos diagnósticos por medio del análisis de concordancia de atributos para datos binarios. Entre el examen directo y el cultivo, no hubo acuerdo. Entre la serología y el examen directo, se encontró que hubo equivalencia, así como entre el cultivo y la serología. No se pudo calcular correlación alguna con la histopatología, ya que no hubo datos negativos, en vista de que todas las muestras procesadas fueron positivas. El diagnóstico de la PCM se basa en la identificación y el aislamiento del hongo. Es obligatoria la realización del examen directo en fresco de toda muestra clínica. Nuestro estudio de muestra que deben realizarse todos los métodos que estén al alcance (examen directo en fresco, cultivo, serología, histopatología) a fin de aumentar la probabilidad de llegar a un diagnóstico certero de esta patología

Paracoccidioidomycosis (PCM) is a chronic, granulomatous disease, endemic in our country, produced by a dimorphic fungus, Paracoccidioides brasiliensis. Several techniques are used for the diagnosis. A study was performed to determine the agreement that could exist between the different techniques, used for the diagnosis of PCM. Clinical records of patients with diagnosis of PCM was made. 251 clinical records were reviewed, from the Sección de Micología Médica “Dr. Dante Borelli”, IMT- UCV, between 2000 and 2010. The agreement between the methods was determined by means of the analysis of agreement of attributes for binary data. Between direct examination and culture, there was no agreement. Between serology and direct examination, there was equivalence, as well as between culture and serology. Correlation could not be calculated with histopathology, since there were no negative data, due to the fact that all the processed samples were positive. The diagnosis of the PCM is based on the identification and isolation of the fungus. Direct examination is mandatory in all clinical samples. Our study demonstrates that all the methods must be performed (direct examination, culture, serology, histopathology) in order to increase the probability of reaching an accurate diagnosis

Diagnóstico de la histoplasmosis diseminada asociada al sida / AIDS-related disseminated histoplasmosis diagnosis

En un paciente con histoplasmosis asociada al sida y lesiones cutáneas, se procedió a realizar el diagnóstico de la micosis mediante la metodología habitualmente empleada, la cual se describe. En estos pacientes, el empleo de la escarificación de las lesiones cutáneas ofrece un método rápido, sencillo y económico para el diagnóstico de esta micosis endémica. La severa inmunodeficiencia de estos pacientes eleva la carga microbiana presente en los tejidos y materiales clínicos, lo cual facilita la aplicación de los métodos directos de diagnóstico micológico como microscopia y cultivo. La observación en las preparaciones microscópicas de levaduras intracelulares, que se tiñen de manera defectuosa con la técnica de Giemsa, orienta a un diagnóstico micológico rápido, confirmado luego a través por los cultivos y permite la administración inmediata del tratamiento antifúngico, lo cual mejora las posibilidades de éxito terapéutico.

In a patient with AIDS-related histoplasmosis, and skin lesions, the diagnosis of mycosis through usual methodology was made, which was described in this paper. The use of skin lesion scarification in these patients offers an economic, fast and simple method for diagnosis of endemic mycosis. The severe immunodeficiency of these patients raises the microbial charge present in tissues and clinical materials, which facilitates the application of direct mycological diagnosis methods such as microscopic analysis and culturing. The observation of intracellular yeast in microscopical preparations, which are irregularly stained through the Giemsa technique, leads to rapid mycological diagnosis, later confirmed by the culturing, and allows the immediate administration of antifungal treatment. All this improves the possibilities of a sucessful treatment.

Diagnóstico micológico en pacientes infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana / Mycological diagnosis in patients infected with human immunodeficiency virus

Con el descubrimiento del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en 1981, la frecuencia de las infecciones oportunistas en pacientes inmunodeprimidos, especialmente los infectados por el VIH, ha experimentado un notable incremento. Dentro de éstas se encuentran las de etiología fúngica, las cuales presentan un alto grado de mortalidad si no son diagnosticadas y tratadas a tiempo. En nuestro país con la instauración de la terapia antirretroviral altamente efectiva a partir del año 2001, se ha notado una reducción significativa en la morbilidad y la mortalidad por infecciones oportunistas, en particular por las micosis, muy comunes en este tipo de pacientes. En el presente estudio se realizó el diagnóstico micológico procedente de pacientes infectados por el VIH/sida, durante el período comprendido entre enero 2005 y diciembre de 2009. De un total de 1173 muestras biológicas procesadas, solamente resultaron positivas 324 para un 27,6% de positividad. La candidiasis orofaríngea y la meningoencefalitis criptococóccica fueron las infecciones diagnosticadas con una mayor incidencia. En las muestras analizadas la concordancia en la positividad entre el examen directo y el examen por cultivo micológico fue de un 56,2%, lo que confirma la importancia del empleo del examen directo en la visualización de estructuras fúngicas a partir de muestras clínicas

With the discovery of the human immunodeficiency virus (HIV) in 1981, the frequency of the opportunistic infections in the immunosuppressed patients, especially the infected ones by the HIV, it has experienced a notable increase. Inside these there are those of micotic aetiology, which present a high grade of mortality, if they are not diagnosed and treated on time. In our country with the instauration of the highly effective antirretroviral therapy since the year 2001, a significant reduction has been seen in the morbidity and the mortality of the opportunistic infections, specialle those caused by fungus, in this type of patients. In the present study the positividad was analyzed in the mycological diagnosis realized by conventional methods of the different clinical samples received in the National Laboratory of Reference of Mycology, from patients infected with HIV/aids during the period between January 2005 and December 2009. Of a whole of 1173 biological samples processed only 324 turned out positive, for 27, 6 % of positivity, being the oropharingeal candidiasis and the cryptococcal meningoencefalitis, those of major incidence observed. In the clinical samples analyzed, a concordance of 56,2 % was obtained in the positividad of the samples studied by means of direct examination and mycologycal cultures, which confirms the importance of direct preparations of clinical samples for the visualization of fungal elements from clinical samples

Especies de Fusarium como agentes de queratitis micóticas en adultos en Tucumán, Argentina / Fusarium species as agents of mycotic keratitis in adults, in Tucumán, Argentina

Las queratomicosis por hongos filamentosos son una de las causas de daño en la córnea en los países de climas tropicales y subtropicales y se consideran dentro de las micosis de difícil tratamiento. El presente estudio evalúa la etiología de las queratitis sicóticas en Tucumán (R. Argentina) para determinar su incidencia e importancia clínica regional. En un lapso de 5 años se estudiaron 48 muestras (biopsias, raspados cornéales y/o aspirados oculares) recogidas por el oftalmólogo y enviadas al laboratorio para análisis micológico. Mediante examen directo, cultivos y estudios macro y micromorfológicos se confirmó etiología micótica en 13 pacientes (27 por ciento). De ellos, se identificaron 7 cultivos como Fusarium solani complex, 4 F. oxysporum y 2 F. verticillioides. Estos hallazgos permiten profundizar el conocimiento de los agentes etiológicos locales involucrados y los factores de riesgo, dos aspectos importantes en la prevención y la terapéutica de estas micosis.

Keratomycosis caused by filamentous fungi is one of the agents of damage to the cornea in subtropical and tropical climate countries and belongs to those mycoses identified as of difficult treatment. This study evaluates the etiology of mycotic keratitis in Tucumán (R. Argentina) with the purpose of assessing its incidence and regional and clinical significance. In a 5-year period, 48 samples (biopsy, corneal scrapes and/or ocular aspiration) collected by the oculist were examined and sent to the laboratory for a mycological analysis. By means of direct exam, macro and micromorphological cultures and studies of the presence of mycotic etiology in 13 patients (27 por ciento) was confirmed. Among them 7 cultures such as a Fusarium solani complex, 4 F. oxysporum and 2 F. verticillioides were identified. These findings allow to enlarge the knowledge of the local etiological agents involved as well as the risk factors, two elements that are significant in the prevention and therapeutics of these mycoses.

Comparación de las coloraciones de Giemsa y Grocott en el diagnóstico de la histoplasmosis / Comparison of Giemsa and Grocott stains in the diagnosis of histoplasmosis

El diagnóstico de histoplasmosis se realiza tradicionalmente mediante el reconocimiento de típicas levaduras intracelulares de Histoplasma capsulatum en preparaciones microscópicas teñidas con Giemsa. Se comparó la eficacia de una modificación rápida de la técnica de Grocott (MRG) y la tradicional de Giemsa para el diagnóstico de la histoplasmosis, a partir de la aplicación de ambas a 10 secreciones respiratorias, 8 escarificaciones de lesiones cutáneas y una biopsia ganglionar, pertenecientes todas a pacientes con sospecha clínica de esta micosis. En 15 de las 19 muestras no se encontraron diferencias significativas en la capacidad y rapidez para arribar al diagnóstico, mientras que en las 4 restantes, fueron reconocidas con la MRG estructuras que pasaron desapercibidas con la coloración de Giemsa. La modificación rápida permitió un reconocimiento más rápido del H. capsulatum en materiales donde este hongo se observó en escaso número y permitió además identificar con seguridad otros patógenos fúngicos diferentes de H. capsulatum, como Pneumocystis jiroveci, Paracoccidioides brasiliensis y Cryptococcus neoformans, difíciles de observar con la coloración de Giemsa. Se propone la técnica de Grocott o su modificación rápida para el diagnóstico de la histoplasmosis, especialmente cuando el empleo de la coloración de Giemsa da lugar a resultados negativos o dudosos.

The diagnosis of histoplasmosis is traditionally achieved by recognizing the typical intracellular yeasts of Histoplasma capsulatum, in smears stained with Giemsa stain. The usefulness of a rapid modification of Grocott and of traditional Giemsa stains for the diagnosis of histoplasmosis was compared applying both techniques in 10 respiratory secretions, 8 cutaneous lesions scrapings and 1 adenomegaly biopsy, all of them belonging to patients with clinically suspected histoplasmosis. In 15 out of the 19 evaluated samples, no significant differences were found in the ability or speed to reach the diagnosis with the applied techniques; while in the remaining 4 samples, structures that had not been observed with Giemsa stain were recognized with the rapid modification. The modification enabled quicker recognition of H. capsulatum than Giemsa stain in those clinical samples where the number of these fungal pathogens was scant. Additionally, the rapid modification also enabled the recognition of fungal pathogens other than H. capsulatum, as Pneumocystis jiroveci, Paracoccidioides brasiliensis and Cryptococcus neoformans, difficult to observe with the Giemsa stain. Use of Grocott technique or rapid modification stain is proposed for the diagnosis of histoplasmosis, when the result obtained with the Giemsa stain is doubtful or negative.